Vincristine sulfate treatment influence on kidney function of female dogs with transmissible venereal tumor / Influência do tratamento com sulfato de vincristina na função renal de cadela com tumor transmissível venéreo

Chemotherapy agents have some undesirable and non-selective cytostatic effects. Considering that kidneys are vulnerable to drug-induced toxicity, this study evaluated renal injury caused by vincristine sulfate (VS) in 12 female dogs diagnosed with transmissible venereal tumor (TVT). The animals were treated with VS (0.025 mg/kg IV) every 7 days for 4 weeks. During treatment, the animals were subjected to clinical examination, blood count, serum measurement of symmetric dimethylarginine (SDMA), blood urea nitrogen (BUN), creatinine, alanine aminotransferase, and alkaline phosphatase. In addition, urinalysis and urinary gamma-glutamyl transferase (GGT) measurements were performed. All parameters were determined three times: before beginning the treatment (T0), after 14 days (T1), and after 28 days (T2). During the study period, there were no changes in serum urea or creatinine levels, urine specific gravity, or persistent proteinuria. Furthermore, urinary GGT measurement did not indicate tubular lesions, and consistent elevation of SDMA was found in only one patient above the reference range. The results showed that weekly therapy with VS as a single agent for 28 days does not induce renal injury in most cases.(AU)

Os agentes quimioterápicos possuem efeitos citostáticos indesejáveis e não seletivos. Considerando a vulnerabilidade renal à toxicidade induzida por drogas, este estudo avaliou a lesão renal causada pelo sulfato de vincristina (VS) em 12 cadelas com diagnóstico de tumor venéreo transmissível (TVT). Os animais foram tratados com VS (0,025 mg / kg IV) a cada sete dias, durante quatro semanas. No transcurso do tratamento, os animais foram submetidos a exame clínico, hemograma, dosagem sérica de dimetilarginina simétrica (SDMA), nitrogênio ureico sanguíneo (BUN), creatinina, alanina aminotransferase e fosfatase alcalina. Além disso, foram realizadas análises de urina e medições de gama-glutamil transferase (GGT) urinária. Todos os parâmetros foram mensurados em três tempos, antes do início do tratamento (T0), aos 14 dias (T1) e aos 28 dias (T2). Durante o período do estudo, não houve alterações nas concentrações de ureia ou creatinina séricas, na gravidade específica da urina ou proteinúria persistente. Além disso, a medição de GGT urinária não indicou lesões tubulares, e elevação consistente de SDMA foi encontrada em apenas um paciente acima do intervalo de referência. Os resultados mostraram que a terapia semanal com VS como agente único por 28 dias não induz lesão renal na maioria dos casos.(AU)

Comparison between hematological and biochemical changes caused by conventional and metronomic chemotherapies in the treatment of canine transmissible venereal tumor / Comparação entre as alterações hematológicas e bioquímicas ocasionadas pela quimioterapia convencional e quimioterapia metronômica no tratamento do tumor venéreo transmissível canino

This study aimed to report the hematological and biochemical changes caused by conventional and metronomic chemotherapies, using vincristine sulfate to treat canine Transmissible Venereal Tumor (TVT). Twelve dogs were selected, six of them for the group receiving conventional chemotherapy (G1), and six dogs for the group receiving metronomic chemotherapy (G2). The G1 group received vincristine sulfate once a week at the dose of 0.75mg/m² until the tumor had disappeared with treatment, and the G2 group was treated with vincristine sulfate three times a week at the dose of 0.25mg/m2 until the tumor had disappeared. Before and after chemotherapy treatment, hematological and biochemical blood tests were performed to evaluate the main alterations caused by both chemotherapeutic models. Dogs undergoing conventional chemotherapy had significant leukocyte changes (p<0.05), causing neutropenia and leukopenia. In dogs undergoing metronomic chemotherapy, leukocytes remained within the reference range. Half of the dogs in group G1 had normochromic, normocytic anemia. The only biochemical alteration observed was the increase of urea in group G2. Thus, metronomic chemotherapy for the treatment of TVT with vincristine sulfate proved to be an excellent method for treatment, with fewer adverse effects, especially in maintaining the leukogram of dogs within normal range and reducing the number of anemia in animals during treatment.(AU)

Esta pesquisa teve como objetivo relatar as alterações hematológicas e bioquímicas causadas pelo tratamento quimioterápico convencional e pela quimioterapia metronômica, utilizando-se sulfato de vincristina para o tratamento do tumor venéreo transmissível canino(TVTC). Foram selecionados 12 cães, sendo seis para o grupo que recebeu quimioterapia convencional (G1) e seis cães para o grupo que recebeu quimioterapia metronômica (G2). O grupo G1 recebeu sulfato de vincristina, uma vez por semana, na dose de 0,75mg/m2, até o desaparecimento do tumor e o grupo G2 foi tratado com sulfato de vincristina, três vezes por semana, na dose de 0,25mg/m2, até o desaparecimento do tumor. Antes e após o tratamento quimioterápico foram realizados exames hematológicos e bioquímicos sanguíneos para avaliação das principais alterações causadas pelos dois modelos quimioterápicos. Os cães submetidos à quimioterapia convencional tiveram alterações leucocitárias significativas (p<0,05), causando uma leucopenia por neutropenia enquanto nos cães, submetidos à quimioterapia metronômica, os leucócitos mantiveram-se dentro do intervalo de referência. A metade dos cães do grupo G1 tiveram uma anemia do tipo normocítica normocrômica. A única alteração bioquímica observada foi o aumento da ureia no grupo G2. Desta forma, a quimioterapia metronômica para o tratamento do TVT com sulfato de vincristina, demonstrou ser um excelente método para a cura do animal, com menores reduções de efeitos adversos, sobretudo, na manutenção do leucograma dos cães e na redução de animais com anemia.(AU)

Tumor venéreo transmissível canino com resistência quimioterápica e metástase esplênica. Relato de caso / Canine transmissible venereal tumor with chemotherapy resistance and splenic metastasis. Case report

RESUMO O Tumor Venéreo Transmissível Canino (TVTC) é uma neoplasia de células redondas que tem a particularidade de se implantar em mucosas que tenham perdido a sua integridade. Nesse local o tumor prolifera e ocasionalmente origina metástase. Em geral, o tumor responde ao tratamento com sulfato de vincristina, porém a resistência quimioterápica associada ao fenótipo tumoral tem sido documentada. Objetivou-se relatar um caso de TVTC genital de fenótipo citológico misto com metástase esplênica e o insucesso da quimioterapia com sulfato de vincristina, em uma fêmea canina, da raça Australian Cattle Dog, de cinco anos de idade. Após diagnóstico citológico e histológico, o tumor primário foi ainda caracterizado em fase de progressão e mostrou baixa expressão de moléculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) (4,4 ± 2% classe I e 11 ± 4,1% classe II). A cadela foi submetida à ovariohisterectomia e esplenectomia terapêutica e não apresentou recidiva do tumor após 12 meses de acompanhamento clínico.

ABSTRACT The canine transmissible venereal tumor is a type of round cell cancer that have the particularity of implanting in mucous tissue, when they lose their integrity, at which point the tumour proliferates and may even develop metastases. The tumor typically responds well to vincristine sulfate chemotherapy, although there are cases of resistance to the drug correlated with the tumoral phenotype. We describe herein a genital mixed TVTC case with metastases at spleen and failure at vincristine sulfate chemotherapeutic treatment in a five years old Australian Cattle Dog female. After the cytological, histological and cytogenetic diagnostic, the primary tumor was still characterized in progression phase and showed low major histocompatibility complex expression MHC (4,4 ± 2% class I e 11 ± 4,1% class II. The dog underwent therapeutic splenectomy and ovariohysterectomy and did not present tumor recurrence within 12 months of clinical follow-up.

Detection of progressive and regressive phase and LINE-1 retrotransposon in transfected dogs with transmissible venereal tumor during chemotherapy

Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a tumor that commonly occurs in genital and extragenital sites of both genders. Long interspersed nuclear elements (LINE-1) retrotransposon has a pivotal role in allogenic transfection among uncontrolled dog populations. This study aimed to perform pathomorphological, immunohistochemical, and in situ polymerase chain reaction (PCR) evaluation of CTVT (n = 18) in transfected dogs during chemotherapy. Immunohistochemically, tumor phases were investigated by using specific markers (CD3, CD4, CD8, CD79, and transforming growth factor beta [TGF-β]), and investigated an amplified specific sequence of TVT LINE-1 retrotransposon by in situ PCR. Polyhedral-shaped neoplastic cells that had large, round, hypo/hyperchromatic nuclei and eosinophilic cytoplasm were detected. All marker results were positive, especially in the early weeks of recovery. CD4 and TGF-β markers were conspicuously positive at the initial stage. In situ PCR LINE-1 sequence was initially positive in only four cases. It is believed that the CD and TGF-β markers provide phase identification at tumor initiation and during chemotherapy. It is thought that presence of T and B lymphocytes, which have roles in cellular and humoral immunity, is needed so that regression of the tumor is possible.

Immunohistochemical, lectin histochemical and ultrastructural studies of canine transmissible venereal tumor in Brazil / Estudos imuno-histoquímico, lectino-histoquímico e ultraestrutural do Tumor Venéreo Transmissível Canino no Brasil

Canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a naturally occurring contagious round-cell neoplasia, with poorly understood origin and transmission. This study aims to further investigate the tumor nature through immunohistochemistry, lectin histochemistry and transmission electron microscopy (TEM) analysis, and to provide support for diagnostic and differential diagnoses of CTVT. Immunohistochemistry was performed in 10 genital and six exclusively extragenital tumors, which were previously diagnosed by citology and histopathology. CTVT samples were incubated with biotinylated antibodies to specific membrane and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-vimentin, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3, polyclonal anti-CD117, polyclonal CD3 and anti-CD79a), followed by the avidin-biotin-peroxidase complex technique. The lectins Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, JSA, PSA, PHA-L, PHA-E and RCA were additionally tested in four genital CTVTs and TEM was performed in eight genital tumors. The anti-vimentin antibody revealed strong immunoreactivity to neoplastic cells in all the assessed samples (16/16). The polyclonal anti-CD3 antibodies showed moderate to strong immunoreactivity in fourteen (14/16) and the polyclonal anti-CD117 in fifteen cases (15/16). There was no immunoreactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-CD18, monoclonal anti-CD117, monoclonal anti-CD3 and anti-CD79a antibodies. At lectin histochemistry, it was observed strong staining of tumor cells to Con-A, PHA-L and RCA. There was no histopathological and immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs. These findings do not support the hypothesis of histiocytic origin of CTVT. In contrast, the lectin histochemical results were similar to cells from lymphoid/myeloid origin.(AU)

O Tumor Venéreo Transmissível Canino (CTVT) é uma neoplasia de células células redondas, contagiosa, com origem e transmissão ainda mal compreendidas. Com a finalidade de aprofundar a investigação sobre a natureza (origem) do TVTC, bem como fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, realizaram-se avaliações imuno-histoquímica, lectino-histoquímica e ultraestrutural de TVTC(s). A avaliação imuno-histoquímica foi feita em 10 TVTCs genitais e em 6 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e da histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-macrófago, anti-vimentina, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79, anti-CD117) com utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase. Adicionalmente, foram utilizadas as lectinas Con A, DBA, SBA, PNA, UEA-1, WGA, sWGA, GSL, SJA, PSA, PHA-L, PHA-E e RCA em quatro TVTCs genitais. Microscopia eletrônica foi realizada em oito TVTC genitais. Em 100% dos tumores testados (16/16) com anticorpo anti-vimentina (mono e policlonal) houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-CD18, anti-CD3, anti-CD79a e anti-CD117 quando empregamos anticorpos monoclonais, entretanto, com a utilização de anticorpos policlonais verificou-se marcação dos tumores com os anticorpos anti-CD3 e anti-CD117. Na avaliação lectino-histoquímica foi verificada forte marcação das células tumorais com Con-A, PHA-L e RCA. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados não corroboram com a hipótese da origem histiocítica do CTVT (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18), entretanto, os resultados da avaliação lectino-histoquímica foram em parte similares aos obtidos quando células de origem linfóide/mielóide (ConA, PHA-L e RCA) foram analisadas (Gimeno et al. 1995).(AU)

Immunocytochemical characterization of primary cell culture in canine transmissible venereal tumor / Caracterização imunocitoquímica de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino

Immunochemistry with anti-vimentin, anti-lysozyme, anti-alpha 1 antitrypsin, anti-CD3 and anti-CD79α antibodies has been used for characterization of primary cell culture in the transmissible venereal tumor (TVT). Samples for primary cell culture and immunohistochemistry assays were taken from eight dogs with cytological and clinical diagnosis of TVT. To validate the immunochemical results in the primary cell culture of TVT, a chromosome count was performed. For the statistical analysis, the Mann-Whitney test with p<0.05 was used. TVT tissues and culture cells showed intense anti-vimentin immunoreactivity, lightly to moderate immunoreactivity for anti-lysozyme, and mild for anti-alpha-antitrypsin. No marking was achieved for CD3 and CD79α. All culture cells showed chromosomes variable number of 56 to 68. This is the first report on the use of immunocytochemical characterization in cell culture of TVT. Significant statistic difference between immunochemistry in tissue and culture cell was not established, what suggests that the use of this technique may provide greater certainty for the confirmation of tumors in the primary culture. This fact is particularly important because in vitro culture of tumor tissues has been increasingly used to provide quick access to drug efficacy and presents relevant information to identify potential response to anticancer medicine; so it is possible to understand the behavior of the tumor.(AU)

Os anticorpos anti-vimentina, anti-lisozima, anti-alfa 1 antitripsina, anti-CD3 e anti-CD79α foram empregados para a caracterização de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino (TVT). Amostras para cultura primária e imuno-histoquímica foram coletadas de oito cães com diagnóstico clínico e citológico de TVT. Para validar o resultado inmunocitoquímico nas culturas de TVT foi realizada a contagem de cromossomos. Para a análise estatística o teste de Mann-Whitney foi empregado a um nível de significância de p<0.05. As culturas e os tecidos de TVT apresentaram intensa reatividade para vimentina, moderada a leve para Lisozima, moderada para alfa-antitripsina e não houve marcação para CD3 e CD79α. Finalmente, todas as culturas apresentaram números de cromossomos que variaram de 56 a 68. Este é o primeiro relato que apresenta o uso da immunocitoquímica para a caracterização de culturas de TVT. Assim, e devido ao fato de se observar semelhança entre a imunomarcação em células e tecidos, sugere-se que o uso desta técnica possa auxiliar na confirmação de culturas primárias do tumor, fato muito importante porque a utilização da cultura do tumor pode permitir o acesso a informação relevante sobre resposta potencial a um tratamento e conhecimento do comportamento biológico do tumor.(AU)

Insertion of the LINE-1 element in the C-MYC gene and immunoreactivity of C-MYC, p53, p21 and p27 proteins in different morphological patterns of the canine TVT / Inserção do elemento LINE - 1 no gene C-MYC e imunorreatividade das proteinas C-MYC, p53, p21 e p27 nos diferentes padrões morfológicos do tumor TVT

The canine transmissible venereal tumor (TVT) affects the external genitalia of dogs by the natural transplant of viable tumor cells. Thus, this research aimed to diagnose and characterize TVT morphological patterns, identify the insertion of the LINE-1 element in C-MYC gene, by means of the polymerase chain reaction (PCR), and evaluate the immunohistochemical expression of C-MYC, p53, p21 and p27 proteins. The relationship between C-MYC and p53 proteins and their interference on the expression of p21 and p27 were also studied. For that, 20 samples of naturally occurring TVT were used, subjected to cytopathological, histopathological and immunohistochemical analysis, and to molecular diagnosis of neoplasia. The increased tissue expression and the correlation among C-MYC, p53, p21 and p27 proteins indicate reduction and/or loss of their functionality in the TVT microenvironment, with consequent apoptotic suppression, maintenance of cell growth and progression of neoplasia.(AU)

O tumor venéreo transmissível canino (TVT) afeta a genitália externa de cães pelo transplante natural de células tumorais viáveis. Assim, esta pesquisa teve como objetivo diagnosticar e caracterizar TVT em padrões morfológicos, identificar a inserção do elemento LINE-1 em gene C-MYC, por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR), e avaliar a expressão imuno-histoquímica do C-MYC, p53, p21 e p27. A relação entre C-MYC e as proteínas p53 e a sua interferência na expressão de p21 e p27 foram também estudadas. Para isso, foram utilizadas 20 amostras de ocorrência natural de TVT, submetido a exame citopatológico, histopatológica e imuno-histoquímica e ao diagnóstico molecular de neoplasia. A expressão aumentada do tecido e a correlação entre a C-MYC e as proteínas p53, p21 e p27 indicam redução e/ou perda de funcionalidade na TVT em seu microambiente, com consequente supressão apoptótica, manutenção do crescimento celular e progressão da neoplasia.(AU)

Frecuencia del tumor venéreo transmisible en perros de la urbanización Mariscal Cáceres, San Juan de Lurigancho. Lima-Perú / Frequency of transmissible venereal tumor in dogs in Mariscal Cáceres neighborhood, San Juan de Lurigancho, Lima

Determinar la frecuencia del Tumor Venéreo Transmisible (TVT) en perros domésticos de la Urbanización Mariscal Cáceres de San Juan de Lurigancho y evaluar la asociación entre diversas variables. Metodología: Se realizaron campañas gratuitas de desparasitación donde se recolectó información epidemiológica por medio de fichas. Las variables de estudio fueron: sexo, edad, convivencia con otros animales, condición de esterilizado y hábitos callejeros. Se realizó el examen clínico en busca de masas sugestivas y sospechosas a TVT, para su posterior examen citológico utilizando tinción Hemacolor. Resultados y Conclusiones: Se examinó clínicamente 243 canes, de ellos 125 hembras y 118 machos. La edad de las hembras osciló entre 6 meses y 10 años y la de los machos entre 5 meses y 9 años. Se encontró 8 perros con presencia de masas sospechosas a los cuáles 5 se confirmaron como TVT. Se encontró una frecuencia del 2.06% (5/243), de los cuales 2.54% (3/118) fueron machos y 1.6% (2/125) fueron hembras. Del 100% de los casos positivos, la edad osciló entre 4 a 9 años. Solo se encontró asociación significativa entre la variable de hábitos callejeros y la presentación del TVT (p<0.05). Se demostró la presencia de TVT en perros de la Urbanización Mariscal Cáceres en el distrito de San Juan de Lurigancho...

To determine the frequency of the Canine Transmissible Venereal Tumor (TVT) in domestic dogs from Mariscal Caceres neighborhood in San Juan de Lurigancho and to establish the association different variables. Methods: A free deworming campaign was made to obtain tissue samples from 243 dogs. According to the epidemiological information and the results of the clinic examination, suspicious and suggestive masses of TVT were evaluated for their later cytological examination using hemacolor stain. Results and Conclusions: A total of 243 dogs, 125 female and 118 male, were studied. The age of female and male dogs oscillated from 6 months to 10 years old and from 5 months to and 9 years old respectively. There were 8 dogs with presence of suggestive masses of TVT and 5 were confirmed. We found a prevalence of 2.06% (5/243, from which 2.54% (3/118) were male and 1.6% (2/125) were female. This was observed in animals from 4 to 9 years old. There is an association between the street habits variable and the presentation of TVT. The gender, the coexistence with other animals, as well as the sterilization variable did not have any significant association with the emergence of this pathology...

Immunohistochemical study of genital and extragenital forms of canine transmissible venereal tumor in Brazil / Estudo imuno-histoquímico de formas genitais e extragenitais do tumor venéreo transmissível canino no Brasil

Aiming to provide insight and discussing the problems related to the diagnosis and differential diagnosis of canine transmissible venereal tumor (CTVT), especially in its extragenital form, immunohistochemical evaluation was performed and a comparison was established by analysis of the microscopic appearance of 10 genital CTVTs and 13 exclusively extragenital CTVTs previously diagnosed by cytology and histopathology. CTVTs samples were incubated with biotinylated antibodies raised against specific membrane (anti-macrophage) and cytoplasmic antigens (anti-lysozyme, anti-S-100 protein, anti-vimentin and anti-CD18) and subsequently developed using streptavidin-biotin peroxidase and streptavidin-biotin-alkaline phosphatase methods. A strong reactivity with the anti-vimentin antibody was found in 100% of the tumors tested (22/22). No reactivity was found for the anti-lysozyme, anti-macrophage, anti-S-100 protein and anti-CD18. No histopathological or immunoreactivity differences between genital and extragenital CTVTs were found. These findings do not corroborate the hypothesis of histiocytic origin of CTVT (no reactivity to anti-lysozyme, anti-macrophage and anti-CD 18 antibodies). In addition, the antibody panel used is useful to narrow the differential diagnosis for lymphomas, histiocytic tumors, amelanotic melanomas, and poorly differentiated epithelial neoplasias, among others.

Com a finalidade de fornecer subsídios e discutir os problemas referentes ao diagnóstico e ao diagnóstico diferencial do tumor venéreo transmissível canino (TVTC), principalmente em sua forma extragenital, foi realizada a avaliação imuno-histoquímica e estabelecido termo de comparação com o aspecto microscópico em 10 TVTCs genitais e em 13 exclusivamente extragenitais previamente diagnosticados através de citologia e histopatologia. Os TVTCs foram testados para reagentes específicos de antígenos de membrana (anti-macrófago) e citoplasmáticos (anti-lisozima, anti-proteína S-100, anti-alfa-1-antitripsina, anti-vimentina e anti-CD18) com a utilização da técnica complexo avidina-biotina-peroxidase e estreptavidina-biotina-fosfatase Em 100% dos tumores testados (22/22) com anticorpo anti-vimentina houve forte imuno-reatividade. Não houve reatividade para os anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago, anti-proteína S-100 e anti-CD18. Não houve diferença histopatológica e de imuno-reatividade entre os TVTCs genitais e extragenitais. Estes achados indicam que os TVTCs avaliados não são de origem histiocítica (ausência de reatividade dos anticorpos anti-lisozima, anti-macrófago e anti-CD18). O painel de anticorpos utilizado é útil para o diagnóstico diferencial deste tumor com linfomas, tumores histiocíticos, melanomas amelanóticos e neoplasias de origem epitelial pobremente diferenciadas, entre outros.

Expressão da glicoproteína-P, proteína associada à múltiplas drogas, glutationa-S-transferase pi e p53 no tumor venéreo transmissível canino / Expression of P-glycoprotein, multidrug resistance-associated protein, glutathione-S-transferase pi and p53 in canine transmissible venereal tumor

The overexpression of proteins P-glycoprotein (P-gp), multidrug resistance-associated protein (MRP1), mutant p53, and the enzyme glutathione-S-transferase (GSTpi) are related to resistance to chemotherapy in neoplasms. This study evaluated the expression of these markers by immunohistochemistry in two groups of canine TVT, without history of prior chemotherapy (TVT1, n=9) and in TVTs presented unsatisfactory clinical response to vincristine sulfate (TVT2, n=5). The percentage of specimens positively stained for P-gp, MRP1, GSTpi and p53 were, respectively 88.8%, 0%, 44.5% and 22.2% in TVT1 and 80%, 0%, 80% and 0% in TVT2. In TVT1, one specimen presented positive expression for three markers and four specimens for two markers. In TVT2, three specimens expressed P-gp and GSTpi. In conclusion, the canine TVTs studied expressed the four markers evaluated, but just P-gp and GSTpi were significantly expressed, mainly at cytoplasm and cytoplasm and nuclei, respectively, either before chemotherapy as after vincristine sulfate exposure. Future studies are needed to demonstrate the function of these two markers in conferring multidrug resistance (MDR) or predict the response to chemotherapy in canine TVT.

A superexpressão das proteínas glicoproteína-P (Gp-P), proteína associada à resistência à múltiplas drogas 1 (MRP1) e p53 mutante e a enzima glutationa-S-transferase pi (GSTpi) está relacionada com resistência à quimioterapia em neoplasias humanas e caninas. Este estudo avaliou a expressão, por meio da imuno-histoquímica desses marcadores em espécimes de TVT caninos sem histórico de quimioterapia prévia (TVT1, n=9) e em TVT caninos que apresentaram resposta clínica insatisfatória ao sulfato de vincristina (TVT2, n=5). A porcentagem de espécimes positivos para Gp-P, MRP1, GSTpi e p53 foram, respectivamente 88,8%, 0%, 44,5% e 22,2% no grupo TVT1 e 80%, 0%, 80% e 0% no grupo TVT2. No TVT1, um espécime apresentou expressão positiva para três marcadores e quatro para dois marcadores. No TVT2, três espécimes expressaram a Gp-P e GSTpi. Em conclusão, os TVTs caninos estudados expressaram os quatro marcadores avaliados, no entanto apenas a Gp-P e GSTpi foram significativamente expressas, principalmente no citoplasmas e no citoplasma e no núcleo, respectivamente, tanto antes da quimioterapia quanto após à exposição ao sulfato de vincristina. Estudos futuros são necessários para demonstrar a função desses dois marcadores em conferir resistência à multiplas drogas (RMD) ou predizer a resposta a quimioterapia no TVT canino.

Histomorphological and immunohistochemical characterization of 172 cutaneous round cell tumours in dogs / Caracterização histomorfológica e imuno-histoquímica de 172 neoplasias cutâneas de células redondas em cães

This paper describes the use of a panel of antibodies (CD117, CD3, CD79a, CD45, cytokeratin, vimentin and E-cadherin) on formalin-fixed, paraffin-embedded sections of canine cutaneous round cell tumours. Neoplastic tumours were diagnosed by histology and histochemical stains and included 107 mast cell tumours, 31 cutaneous histiocytomas, two localized histiocytic sarcomas, 21 cutaneous lymphomas, three plasma cell tumours, one transmissible venereal tumour and seven unclassified round cell tumours. The histologic diagnosis was modified in 39.5% of the total 172 neoplasms. The staining for CD45 and Ecadherin were variable, and therefore, the final diagnoses of cutaneous histiocytoma and localized histiocytic sarcoma were made based on histology in association with negative results for CD3, CD79a, CD117 and cytokeratin. The cellular origin of unclassified round cell tumours was defined in all cases. Cutaneous B-cell lymphoma and plasma cell tumours were CD79a-positive and could be distinguished from each other by the morphological characteristics. Mast cell tumours and T cell lymphoma were CD117 and CD3 positive, respectively. The positive staining for vimentin and the negative staining for CD3, CD79a, CD117 and cytokeratin favoured the diagnosis of transmissible venereal tumours. Thus, the final diagnosis of cutaneous round cell tumours should be based on the interpretation of immunohistochemical results together with the cellular morphology observed by histology. Therefore, more studies to optimize the specific markers in formalin-fixed, paraffinembedded tissues (especially for histiocytes) are required for definitive diagnosis of round cell tumours in dogs.

Este trabalho descreve o uso de um painel de anticorpos (CD117, CD3, CD79a, CD45, citoqueratina, vimentina e e-caderina em tecidos formalizados e parafinizados para o diagnóstico de neoplasias de células redondas em cães. Os tumores foram diagnosticados usando-se a histopatologia e a marcação imuno-histoquímica. Foram incluídos 107 mastocitomas, 31 histiocitomas cutâneos, 2 sarcomas histiocíticos localizados, 21 linfomas cutâneos, 3 plasmocitomas, 1 tumor venéreo transmissível e 7 tumores de células redondas não classificados. O diagnóstico histológico foi modificado em 39,5% do total de 172 neoplasias. A marcação do anticorpo CD45 e E-caderina foi variável e, nesse sentido, o diagnóstico final de histiocitoma cutâneo e sarcoma histiocítico localizado foi baseado na histologia em associação com os resultados negativos para CD3, CD79a, CD117 e citoqueratina. A origem celular dos tumores de células redondas não classificados foi definida em todos os casos. Linfoma cutâneo de célula B e plasmocitoma foram positivos para CD79a e foram distinguidos entre si pelas características morfológicas. Marcação positiva para vimentina e negativa para CD3, CD79a, CD117 e citoqueratina favoreceram o diagnóstico dos tumores venereos transmissíveis. Assim, o diagnóstico final dos tumores de células redondas foram baseados na interpretação dos resultados da imuno-histoquímica em conjunto com a avaliação das características morfológicas observadas na histologia. Finalmente, mais estudos em relação à padronização de marcadores específicos para tecidos parafinizados (especialmente para histiócitos) são necessários para o diagnóstico definitivo das neoplasias de células redondas em cães.

TP53 Polymorphisms allow for genetic sub-grouping of the canine transmissible venereal tumor

The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is found mainly in dogs' sexual organs. Currently, it is widely accepted that all samples of CTVT show similar histopathological characteristics and share common genetic alterations. Despite the common genetic origin of CTVT, mutations in the P53 gene have been reported. In this study, we proposed that tumor samples can be genetically grouped using this gene. The presence of different subgroups of CTVT was determined in Mexican dogs using the TP53 gene sequence in CTVT samples. Four new polymorphisms were found and therefore, the CTVT samples were classified in five subgroups.

Uso da 99mTc-Timina na identificação de metástases de tumor venéreo transmissível canino com apresentação cutânea / The use of 99mTc-Thymine to identify metastatic disease in dogs presenting the cutaneous form of canine transmissible venereal tumor

O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é descrito na literatura como raramente metastático. Entretanto, métodos acurados para verificação dessa afirmativa não estão disponíveis na rotina veterinária. Neste trabalho utilizou-se a cintilografia com 99mTc-Timina para avaliar a disseminação do TVTC com apresentação cutânea. Houve captação da 99mTc-Timina nos três casos de TVTC estudados. A cintilografia com 99mTc-Timina é uma técnica não-invasiva e promissora para a avaliação do grau de disseminação tumoral em casos de TVTC. Sugerimos o seu uso na Oncologia Veterinária para localização de TVTC.

The venereal canine transmissible tumor (VCTT) is described in literature as a rare metastatic tumor. However accurate methods for verification of this affirmative are not available in the veterinary medicine routine. In this study, we evaluated the dissemination from VCTT with cutaneous presentation using the 99mTc-Thymine scintigraphy. The labelled thymine was uptaken by the three cases of VCTT. 99mTc-Thymine is a promising imaging technique for non-invasive veterinarian evaluation of tumoral dissemination degree decurrent from the VCTT cases.

Apoptosis in the transplanted canine transmissible venereal tumor during growth and regression phases / Apoptose no tumor venéreo transmissível canino durante as fases de crescimento e regressão

Twelve male, mongrel, adult dogs were subcutaneously transplanted with cells originated from two canine transmissible venereal tumors (TVT). The aim was to demonstrate and to quantify the occurrence of apoptosis in the TVT regression. After six months of transplantation, a tumor sample was obtained from each dog, being six dogs with TVT in the growing phase and six in the regression phase as verified by daily measurements. Samples were processed for histological and ultrastructural purposes as well as for DNA extraction. Sections of 4µm were stained by HE, Shorr, methyl green pyronine, Van Gieson, TUNEL reaction and immunostained for P53. The Shorr stained sections went through morphometry that demonstrated an increase of the apoptotic cells per field in the regressive tumors. It was also confirmed by transmission electron microscopy, which showed cells with typical morphology of apoptosis and by the TUNEL reaction that detected in situ the 3'OH nick end labeling mainly in the regressive tumors. The regressive TVTs also showed an intensified immunostaining for P53 besides a more intense genomic DNA fragmentation detected by the agarose gel electrophoresis. In conclusion, apoptosis has an important role in the regression of the experimental TVT in a way that is P53-dependent.

Doze cães, adultos, machos e sem raça definida foram transplantados subcutaneamente, na região hipogástrica, com células originadas de dois tumores venéreos transmissíveis caninos (TVT). O objetivo do estudo foi demonstrar e quantificar a ocorrência de apoptose na regressão do TVT. Após seis meses, foi obtido um tumor de cada animal, totalizando seis em crescimento e seis em regressão. Fragmentos dos tumores foram processados para avaliação histológica, ultra-estrutural e também para extração de DNA. Cortes de 4µm foram corados em HE, Shorr, verde de metila pironina e Van Gieson e alguns foram submetidos à reação do TUNEL e à imunoistoquímica para P53. Secções coradas pelo Shorr, submetidas à morfometria, demonstram maior índice apoptótico nos tumores em regressão. Esse achado foi confirmado pela microscopia eletrônica de transmissão que evidenciou células com morfologia típica de apoptose e pela reação de TUNEL que marcou mais células nos tumores em regressão que naqueles em crescimento. A imunomarcação para P53 foi mais intensa nos tumores em regressão, assim como a fragmentação internucleossômica do genoma mostrada pela eletroforese em gel de agarose. Concluiu-se que a apoptose tem importante papel na regressão do TVT transplantado experimentalmente, sendo, nesse caso, dependente de P53 para a sua execução.

Eritrocitose associada a tumor venéreo transmissível em cão: relato de caso / Erythrocytosis in a dog with transmissible venereal tumor: case report

Descreve-se um caso de eritrocitose absoluta (hematócrito: 74 por cento, hemoglobina: 24,2g/dl) em um cão com tumor venéreo transmissível cutâneo. A concentração de hemoglobina e o hematócrito retornaram ao valor normal após o tratamento com vincristina. A remissão da eritrocitose após o tratamento é sugestiva de uma associação entre o tumor e a alteração hematológica.

This report describes a case of absolute erythrocytosis (hematocrit: 74 percent, hemoglobin: 24.2g/dl) in a dog with transmissible cutaneous venereal tumor. Hemoglobin and hematocrit returned to normal range after the treatment with vincristine. The remission of the erythrocytosis after treatment suggests a relationship between the neoplastic lesions and the hematological abnormality.

O tumor venéreo transmissível canino. Aspectos gerais e abordagens moleculares (revisão de literatura) / The vanine transmissible venereal tumor. General aspects and molecular approach (review)

O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é uma neoplasia indiferenciada de células redondas cujo crescimento é rápido. Em animais adultos e saudáveis o tumor tende a regredir espontaneamente. Em animais jovens ou imunossuprimidos essa neoplasia pode metastatizar para outros órgãos. Uma característica marcante desse tumor é o dato dele ser de fácil transplantação e rápido crescimento propiciando a oportunidade de utilização de marcadores de proliferação celular e estudo da cinética tumoral. Sua regressão espontânea abre uma perspectiva para o estudo da morte celular por apoptose. Além disso, o TVTC, é um excelente modelo para o estudo da interação entre a imunidade do hospedeiro e o crescimento tumoral.

Sequence analysis of canine LINE-1 elements and p53 gene in canine transmissible venereal tumor

LINEs (long interspersed nuclear elements or long interspersed repeated DNA elements) contains two open reading frames (ORFs), ORF1 and ORF2. We analysed the ORF2 located in the 5' region to the first exon of oncogene c-myc in canine transmissible venereal tumor (TVT) cell. We also showed the transcription activation was induced by this TVT-LINE sequence using CAT assay. To identify the mutation of tumor suppressor gene, sequence analysis of p53 from TVT cell was performed. We identified the point mutation of 964 nucleotide (T-->C) resulting in the change of amino acid (Phe-->Ser) of p53 tumor suppressor protein.

Apoptose no tumor venéreo transmissível canino: características morfológicas e evidenciaçäo bioquímica / Apoptosis in the canine transmissible venereal tumor: morphological features and biochemical evidence

Fragmentos de tumor venéreo transmissível canino (TVTC) de ocorrência natural, com localizaçäo genital, foram obtidos de cinco animais, machos, adultos, sem raça definida. "Imprints" da superfície de corte em lâmina de microscopia foram fixadas em metanol, coradas pelo Giemsa e submetidas à avaliaçäo citológica. Os fragmentos foram fixados e processados rotineiramente para inclusäo em parafina e coloraçäo com HE e Shorr, para confirmaçäo histológica do tumor e identificaçäo da apoptose. Outros fragmentos foram envolvidos com papel alumínio e acondicionados dentro de frascos de vidro em gelo seco, para serem processados no mesmo dia, visando à extraçäo de DNA e eletroforese em gel de agarose. Análises cito e histológica do TVTC mostraram a distribuiçäo e o padräo celular e tecidual característicos dessa neoplasia, sobressaindo-se a presença de vacúolos claros, bem definidos no citoplasma à análise citológica. Pela coloraçäo com Shorr pôde-se identificar células retraídas, com aumento da acidofilia citoplasmática e condensaçäo da cromatina nuclear, às vezes com fragmentaçäo do núcleo e das células, caracterizando apoptose. A coloraçäo pelo Shorr mostrou ser mais eficiente na distinçäo de células apoptóticas do que a coloraçäo por HE. A eletroforese de DNA em gel de agarose demonstrou a fragmentaçäo internucleossômica do genoma, que pôde ser reconhecida pelo clássico "padräo em escada"

Caracterizaçäo e quantificaçäo de regiöes organizadoras de nucléolos coradas pela prata (AgNORs) em tumor venéreo transmissível canino, genital e extragenital / Nucleolar organizing regions (AgNORs) in genital and extra genital canine transmissible venereal tumor: characterization and quantification

Foram estudadas 60 amostras de tumor venéreo transmissível canino (TVTC), sendo 30 genitais e 30 extragenitais. Consideraram-se os dados clínicos e anatomopatológicos na classificaçäo de cada tumor. Os cortes de 4µm foram corados com HE para confirmaçäo dos diagnósticos e pela técnica de Giemsa para diferenciaçäo com mastocitoma. Outra série de cortes foi corada pela prata, para permitir a quantificaçäo das AgNORs a partir da microscopia óptica e morfometria computadorizada. O estudo da variaçäo da instabilidade de valores médios com relaçäo ao tamanho da amostra permitiu estabelecer o mínimo representativo de 30 células por caso/lâmina. Näo se observou diferença histológica qualitativa entre os tumores de localizaçäo genital e extragenital na microscopia óptica. No entanto, foi possível diferenciar os TVTC genitais dos extragenitais pela quantificaçäo das AgNORs na microscopia óptica e pela morfometria do número, área total de AgNORs do núcleo e nucléolo e áreas de núcleo e nucléolo por meio de digitalizaçäo das imagens

Tumor venéreo transmissível (TVT) extragenital em cäo. Relato de caso / Extragenital transmissible venereal tumor in a dog. Case report

This report describes a case of cutaneous transmissible veneral tumor (TVT) in a three-year-old male mongrel dog. Through clinical examination it was observed several cutaneous nodule ranging from aproximately 5mm to 4cm in diameter, some of which ulcerated, and several small and ulcerated nodules on the mucous membrane of the mouth. Through the Fine Meedle Aspiration (FNA) technique, the material of cutaneous nodules was sampled and processed for citologic and karyotypic exams. Upon citology, there was abundance of cells with round nuclei with coarsely granular chromatin and single distinct nucleoli, and cytoplasm containing several vacuoles. The karyotype showed a number of 58 chromosomes. Based on cytological and karyotypic findings extragenital TVT was diagnosed. The dog was treated with vincristine sulfate (Oncovin) in a dose of 0,025 mg/kg/weekly/IV. After the second aplication there was a reduction of 80 per cent of nodules with a complete cure at the end of the treatment